(一)操作室厭氧環境形成：
1.按使用要求放置好必要的附件和器具；
2.通電源開照明燈，開溫控儀，調節所需溫度；
3.操作室內放入1000g鈀粒(封閉)和500g干燥劑，并放入美蘭指示紙(封閉)；
4.關緊取樣室內外門，并抽真空校驗；
5.操作室內*次置換(氮氣置換)：
A.把乳膠手套套在觀察板法蘭圈上并扎緊
B.接通氮氣進氣路，打開氮氣控制閥1，使手套鼓起，關閉閥門1，然后扎緊袋口；
6.操作室第二次置換(氮氣置換)重復一次充氮過程，取樣室先抽真空，并注意隨時用腳踏開關開閉排氣。如此連續三次氮氣置換。
7.操作室第四次置換(混合氣體置換)：
(混合氣體配比為N2 85%、H2 10%、CO2 5%)
A.調換氣路打開混合氣閥3進氣，充氣時取樣室先抽真空，并隨時用腳踏開關開閉排氣；
B.關掉混合氣體閥3，并打開閥5，使混合氣體經過流量計，調整流量計，流量為每分鐘10ml左右；
C.混合氣體重復2-3次轉換，經過上述過程，基本形成厭氧環境。
8.操作室內打開粑粒除氧劑，接通除氧催化器電源進行催化除氧，一小時后打開美蘭指示紙觀察其變*況，不變色為操作室內達到厭氧環境；
9.開紫外線滅菌燈，室內進行滅菌處理，滅菌時間按具體實驗自定。
(二)菌種的置入和培養：
1.檢查取樣室內門并關緊；
2.打開取樣室外門，將菌種放入取樣室后即關上外門；
3.取樣室充氮置換三次過程：打開真空泵，先抽真空度500ml汞柱(66kPa)以上停，然后人工打開氮氣閥2進氣，使指針回復零位，關掉閥2。第二次重復操作一次。第三次操作時，使真空度500ml汞柱(66kPa)以上停，然后打開閥4進混合氣，使指針回復零位，關掉閥4。取樣室充氮置換三次過程結束；
4.如選定真空度較低就需要增加置換的次數；
5.取樣室外門開啟、關緊，再抽低真空度100ml汞柱(13kPa)檢驗；
6.厭氧培養箱需要長期連續使用的條件：
A.每天在操作室內打開美蘭指示紙觀察，如不正常就必須重新換氣；
B.要長期連續輸入微量的混合氣體，使補進的氮氣能和微量的氧結合通過催化吸收，保證室內厭氧狀態，補入混合氣流量選定為每分鐘10ml左右；
C.連續培養運行一天，更換一次除氧劑和干燥劑。
D.操作室內溫度可任意選擇和控制。
7.混合氣瓶、氮氣瓶輸出壓力調整：調節減壓閥，使輸出壓力0.1Mpa左右。
注意事項
1.儀器盡可能地安裝于空氣清凈、溫度變化較小的地方；
2.開機前應全面熟悉和了解各組成配套儀器、儀表的使用說明，掌握正確使用方法；
3.培養物放入必須是在操作室內達到厭氧環境后放入；
4.如發生故障(停氣等原因)操作室內仍可保持10小時厭氧狀態(超過10小時則根據需要把培養物取出另作處理)；
5.經常注意氣路有無漏氣現象；
6.調換氣瓶時，注意要扎緊氣管，避免流入含氧氣體；
真空泵按要求使用，定期檢查加油.